qpcr原理及操作步驟
qpcr原理:通過凝膠電泳、毛細管電泳等方法對產物進行檢測。qpcr應用於大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫站、食品企業及乳品廠等。
1、qpcr是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環後產物總量的方法。DNA由去氧核苷酸組成的大分子聚合物。去氧核苷酸由鹼基、去氧核糖和磷酸構成。其中鹼基有4種:腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。
2、Real-timePCR是在PCR擴增過程中,通過熒光信號,對PCR進程進行實時檢測。逆轉錄PCR,或者稱反轉錄PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA,再以此為模板透過PCR進行DNA複製。由一條RNA單鏈轉錄為互補DNA(cDNA)稱作“逆轉錄”,由依賴RNA的DNA聚合酶(逆轉錄酶)來完成。
3、由於在PCR擴增的指數時期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關係,所以成為定量的依據。數字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子絕對定量技術。相較於qPCR,數字PCR可讓你能夠直接輸出DNA分子的個數,是對起始樣品的絕對定量。
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