qpcr原理及操作步驟

qpcr原理：通過凝膠電泳、毛細管電泳等方法對產物進行檢測。qpcr應用於大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫站、食品企業及乳品廠等。

1、qpcr是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環後產物總量的方法。DNA由去氧核苷酸組成的大分子聚合物。去氧核苷酸由鹼基、去氧核糖和磷酸構成。其中鹼基有4種：腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。

2、Real-timePCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。逆轉錄PCR，或者稱反轉錄PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)，是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA，再以此為模板透過PCR進行DNA複製。由一條RNA單鏈轉錄為互補DNA(cDNA)稱作“逆轉錄”，由依賴RNA的DNA聚合酶（逆轉錄酶）來完成。

3、由於在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關係，所以成為定量的依據。數字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一種核酸分子絕對定量技術。相較於qPCR，數字PCR可讓你能夠直接輸出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。