琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
不同大小的DNA片段,在碱性条件下带负电荷,在电流的作用下,由负极向正极移动,根据不同DNA分子片段的大小和形状不同,其在电场中泳动的速率也不同,于是在相同时间的情况下,经过紫外照射,就可以看到DNA的位置,从而达到分离、鉴定的目的。
琼脂糖凝胶电泳步骤:1、用蒸馏水将制胶工具洗干净,准备好制胶平板,用琼脂将模具边缘封闭,架好梳子;2、根据要分离的样品(DNA)大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。准确的称取一定量的琼脂糖干粉,加入到合适体积的锥形瓶中,加入一定量的电泳缓冲液(30ml左右TAE);放入到微波炉内加热融化,冷却片刻(不烫手即可)。
3、融化后的琼脂溶液摇晃混匀,倒入电泳槽中,等其凝固;4、室温下凝固30-40min左右,小心的拔出梳子,取出凝固好的凝胶放入电泳槽内,准备上样;5、在电泳槽中倒入电泳缓冲液(TAE);没过胶面1mm左右,去除胶孔内的气泡。
6、上样,5ulDNA样品加入1ul上样缓冲液(loading buffer)和1ul的染料,用抢混匀后加入到凝胶孔内;7、上样结束,接通电源,红色正极,黑色负极,DNA样品有负极往正极运动,加样孔侧为负40-50v电压,电压30敏左右即可(<40min);8、电压结束,关闭电源,凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker判断大小。
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