瓊脂糖凝膠電泳的原理和方法
不同大小的DNA片段,在鹼性條件下帶負電荷,在電流的作用下,由負極向正極移動,根據不同DNA分子片段的大小和形狀不同,其在電場中泳動的速率也不同,於是在相同時間的情況下,經過紫外照射,就可以看到DNA的位置,從而達到分離、鑑定的目的。
瓊脂糖凝膠電泳步驟:1、用蒸餾水將制膠工具洗乾淨,準備好制膠平板,用瓊脂將模具邊緣封閉,架好梳子;2、根據要分離的樣品(DNA)大小配製合適濃度的瓊脂糖凝膠。準確的稱取一定量的瓊脂糖乾粉,加入到合適體積的錐形瓶中,加入一定量的電泳緩衝液(30ml左右TAE);放入到微波爐內加熱融化,冷卻片刻(不燙手即可)。
3、融化後的瓊脂溶液搖晃混勻,倒入電泳槽中,等其凝固;4、室温下凝固30-40min左右,小心的拔出梳子,取出凝固好的凝膠放入電泳槽內,準備上樣;5、在電泳槽中倒入電泳緩衝液(TAE);沒過膠面1mm左右,去除膠孔內的氣泡。
6、上樣,5ulDNA樣品加入1ul上樣緩衝液(loading buffer)和1ul的染料,用搶混勻後加入到凝膠孔內;7、上樣結束,接通電源,紅色正極,黑色負極,DNA樣品有負極往正極運動,加樣孔側為負40-50v電壓,電壓30敏左右即可(<40min);8、電壓結束,關閉電源,凝膠成像儀上觀察電壓位置並比對marker判斷大小。
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